丙酮酸脫羧酶（PDC）測(cè)試盒的操作步驟

（Pyruvate Decarboxylase Kit，PDC 分光光度法）

一、測(cè)定原理：

PDC催化丙酮酸脫羧生成乙醛，添加乙醇脫氫酶

（ADH）來(lái)進(jìn)一步催化NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+；

NADH 在340nm有吸收峰，而NAD+沒(méi)有；通過(guò)測(cè)定340nm

光吸收下降速率，來(lái)計(jì)算PDC 活性。

二、測(cè)定意義：

PDC主要存在于酵母中，是乙醇發(fā)酵的關(guān)鍵酶之一，催

化丙酮酸脫羧生成乙醛。

三、自備儀器或用品：

研缽、冰、臺(tái)式離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)、1mL石英比

色皿、可調(diào)式移液槍和蒸餾水。

四、試劑盒組成(50T/48 樣)：

試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體×1 瓶，4℃保存。

試劑四：粉劑×1 瓶，﹣20℃保存。

試劑五：液體×1 瓶，﹣20℃保存。

混合試劑：臨用前配制，小心把試劑四和五轉(zhuǎn)移到試劑三中，

充分溶解。

試劑六：液體×1 瓶，4℃保存。

五、粗酶液提取:

1、細(xì)菌或細(xì)胞處理：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后

棄上清；按照每200 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入400μL提取

液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率200W，工作3s，

間歇10s，工作35次），16000g 4℃離心20min，取上

清，置冰上待測(cè)。

2、組織處理：按照組織質(zhì)量（g）:提取液體積(mL)為1：5～

10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）

進(jìn)行冰浴勻漿，16000g 4℃離心20min，取上清，置

冰上待測(cè)。

3、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)

六、操作步驟:

注：ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×10 3L/mol/cm；

d：比色皿光徑，1cm；

V 總：反應(yīng)體系總體積，1mL=0.001 L；

V 樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，0.1mL；

Cpr：蛋白濃度，mg/mL（需要另外測(cè)定，建議使用本

公司BCA蛋白質(zhì)含量試劑盒）；

W：樣本質(zhì)量，g；

V 樣總：加入提取液體，1mL；

細(xì)胞數(shù)：細(xì)胞總數(shù)量，10 4個(gè)；

T：反應(yīng)時(shí)間，1 min。

丙酮酸脫羧酶（PDC）測(cè)試盒的操作步驟