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上海信帆生物:構(gòu)建無(wú)抗性篩選標(biāo)記的穩(wěn)定自主發(fā)光的分枝桿菌

更新時(shí)間:2016-06-03      瀏覽次數(shù):1156

分枝桿菌引起的疾病,如結(jié)核病、麻風(fēng)病和布魯利壞死病(Buruli ulcers)一直是引起高致殘率和死亡率的疾病。耐藥結(jié)核菌及其與艾滋病并發(fā)對(duì)結(jié)核病的防控帶來(lái)了極大挑戰(zhàn)。多數(shù)致病性分枝桿菌生長(zhǎng)緩慢,嚴(yán)重阻礙了對(duì)該類病原菌的研究和藥物、疫苗的研發(fā)等。

研究團(tuán)隊(duì)前期研究已證明自主發(fā)光的結(jié)核分枝桿菌可作為良好的報(bào)告菌株,能極大降低體外抗結(jié)核藥物篩選和體內(nèi)篩選、評(píng)價(jià)抗結(jié)核藥物和疫苗的成本,縮短時(shí)間,節(jié)約人力和減少小動(dòng)物的使用。然而,前期構(gòu)建的菌株發(fā)光元件并不是十分穩(wěn)定,而且有一個(gè)卡那霉素抗性基因標(biāo)記,該標(biāo)記可能由于具有潛在的交叉耐藥的特性,不適合篩選某些類型的化合物,更不適合評(píng)價(jià)潛在的藥物組合。結(jié)核菌有限的篩選標(biāo)記基因(常用的只有2個(gè))也是帶有篩選標(biāo)記基因的一個(gè)重要缺陷,限制了其在基礎(chǔ)研究中的多項(xiàng)應(yīng)用。因此,無(wú)抗性標(biāo)記的更穩(wěn)定的自主發(fā)光菌具有更高的研究和應(yīng)用價(jià)值。

經(jīng)研究,研究團(tuán)隊(duì)成功構(gòu)建了一種用于構(gòu)建無(wú)抗性標(biāo)記重組分枝桿菌的抗性表達(dá)盒,同時(shí)采取多種策略進(jìn)行研究,zui終實(shí)現(xiàn)了一步法構(gòu)建自主發(fā)光分枝桿菌,包括結(jié)核分枝桿菌(實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)株和多種研究耐藥株)、卡介苗(BCG)、海分枝桿菌和非致病的恥垢分枝桿菌等,這些自主發(fā)光分歧桿菌不僅無(wú)篩選標(biāo)記而且發(fā)光元件非常穩(wěn)定。張?zhí)煊钛芯拷M已經(jīng)利用該類發(fā)光菌建立了、完整的抗結(jié)核藥物篩選評(píng)價(jià)平臺(tái),同時(shí)與相關(guān)單位合作,篩選了4萬(wàn)多個(gè)化合物并進(jìn)行了不同階段的研究。目前已獲得近十個(gè)具有體內(nèi)抗結(jié)核活性的化合物,申請(qǐng)3個(gè)。

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