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上海信帆生物:有絲分裂(Feulgen染色法)

更新時(shí)間:2016-05-11      瀏覽次數(shù):1483

實(shí)驗(yàn)原理:細(xì)胞中的DNA受1NHC1,60℃水解作用以后,核酸中的嘌呤堿很快*被除掉,使脫氧核糖中潛在的醛基獲得自由狀態(tài)。水解后,組織要經(jīng)水洗再移至希夫(Schiff)試劑中,希夫試劑即同露出來(lái)的醛基發(fā)生反應(yīng),呈現(xiàn)紫紅色。這個(gè)反應(yīng)是Feulgen在1942年提出來(lái)的,是DNA的一個(gè)特異性檢查法。 
水解的時(shí)間很重要,因?yàn)楹怂岬乃庥袃蓚€(gè)過(guò)程,*,漂呤堿很快被除掉,脫氧核糖中潛在的醛基顯露出來(lái),第二,組蛋白和核酸愈來(lái)愈多地被除掉。在短時(shí)間的水解作用以后,*個(gè)過(guò)程占優(yōu)勢(shì),這時(shí)候用希夫試劑染色,染色體的染色作用zui強(qiáng)。隨著水解作用的繼續(xù)進(jìn)行,第二個(gè)過(guò)程逐漸變成優(yōu)勢(shì),因此水解液中的希夫反應(yīng)增強(qiáng),而染色體中的希夫應(yīng)減弱。zui后,第二個(gè)過(guò)程超過(guò)*過(guò)程時(shí),染色體也隨之停止反應(yīng)。 
希夫試劑是堿性品紅———亞硫酸溶液,呈無(wú)色。與DNA醛基反應(yīng)后,使堿性品紅恢復(fù)原來(lái)的紅色。 
二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模河^察蠶豆根尖細(xì)胞或其它根尖細(xì)胞內(nèi)染色體中的DNA,以及染色體在有絲分裂中的行為,掌握Feulgen染色方法。 
三、實(shí)驗(yàn)材料:上次實(shí)驗(yàn)制成了石蠟切片。 
四、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備: 
1.用具 立式染色缸一套,鑷子,蓋玻片,小漏斗,鐵架,毛邊紙,玻璃棒,顯微鏡,恒溫水浴鍋,溫度計(jì),燒杯,棕色瓶,黑紙。 
2.玻璃器皿的清洗 主要是染色缸的清洗,一般用肥皂粉洗,用水沖凈即可,如不能洗凈時(shí),要用洗液浸泡后,再?zèng)_洗,自來(lái)水洗后,再用少量蒸餾水過(guò)洗一次。盛放100%酒精、二甲苯的染色缸必須干燥,缸蓋內(nèi)緣必須涂以幾士林,以防止蒸發(fā)和收水分,影響濃度。染色缸上要貼上標(biāo)簽。 
3.實(shí)驗(yàn)所需藥口及配制 
濃鹽酸(36—38%),堿性品紅,偏重亞硫酸鈉(Na2S2O5); 
亞硫酸鈉(Na2SO3),固綠(fast green),加拿大中性樹(shù)膠乙醇(30—100%),二甲苯。 
藥品配制: 
1各種濃度的乙醇配制.
21NHCI配制:取濃HCI 82.5毫升加蒸餾水至1000毫升,搖勻。 
3Sciff 試劑的配制 
0.5克堿性品紅,加到已經(jīng)煮沸的100毫升蒸餾水中,再煮沸3—4分鐘,待溶液冷卻到50℃時(shí)過(guò)濾,再等溶液冷到25℃以下時(shí),加入10毫升的1NHCI和1。5克偏重亞硫酸鈉,裝在棕色瓶中,塞緊瓶子,用黑紙包好,放在暗處,第二天觀察,溶液還是淡紅色就不能用,只得重配。 
偏重亞硫酸鈉與1NHCI反應(yīng),放出SO2,SO2與堿性品紅反應(yīng),生成堿性品紅--亞硫酸溶液,呈無(wú)色。 
4漂染液的配制 
先配10%的亞硫酸鈉溶液。 
把10%亞硫酸鈉溶液10毫升加200毫升蒸餾水,再加10毫升1NHCI,即成漂當(dāng)液。 
5固綠染色液 
0.5克固綠溶于100毫升95%乙醇溶液。 
五、實(shí)驗(yàn)步驟:
水解 先在恒溫水浴箱中準(zhǔn)備好恒溫60℃的1NHCI。注意一定要控制好溫度不能過(guò)高,高了醛基要破壞,低了小解不充分,醛基不能釋放出來(lái)。水解的時(shí)間長(zhǎng)短要根據(jù)材料,以及固定液的種類(lèi)而定。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果,取一個(gè)適當(dāng)時(shí)間。

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