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蛋白質(zhì)染色知多少,信帆生物為你答疑解惑

更新時(shí)間:2015-10-28      瀏覽次數(shù):1562

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染色液種類(lèi)繁多,各種染色液染色原理不同,靈敏度各異。使用時(shí)可根據(jù)需要加以選擇。常用的染色液有:

1.氨基黑10B(amino black 10B又稱(chēng)為amidoschwarz 10B或naphthalene blueblack,2B 200)氨基黑10B分子式為C22H13N6S3Na3,MW=715,λmax=620-630nm,是酸性染料。其磺酸基與蛋白質(zhì)反應(yīng)構(gòu)成復(fù)合鹽,是zui常用的蛋白質(zhì)染料之一,但對(duì)SDS-蛋白質(zhì)染色效果不好。另外,氨基黑10B染不同蛋白質(zhì)時(shí),著色度不等、色調(diào)不一(有藍(lán)、黑、棕等);作同一凝膠柱的掃描時(shí),誤差較大。

2.考馬斯亮藍(lán)R250(coomassie brilliant blue R250,簡(jiǎn)稱(chēng)CBBR250或PAGE blue83)

考馬斯亮藍(lán)R250的分子式為C14H44O7H3S2Na,MW=824,λmax=560-590nm。染色靈敏度比氨基黑高5倍。該染料是通過(guò)范德瓦爾鍵與蛋白質(zhì)結(jié)合,尤其適用于SDS電泳微量蛋白質(zhì)染色,但蛋白質(zhì)濃度超過(guò)一定范圍時(shí),對(duì)高濃度蛋白質(zhì)染色不合乎Beer定律,作定量分析時(shí)要注意這點(diǎn)。

3.考馬斯亮藍(lán)G250(簡(jiǎn)稱(chēng)CBBG250或PAGE blue G90,又名xylene brilliant cyanin G)

考馬斯亮藍(lán)G250比CBB R250多二個(gè)甲基。MW=854,λmax=590-610nm。染色靈敏度不如R250,但比氨基黑高3倍。其優(yōu)點(diǎn)是在三氯一酸中不溶而成膠體,能選擇地使蛋白質(zhì)染色而幾乎無(wú)本底色,所以常用于重復(fù)性好和穩(wěn)定的染色,適于作定量分析。

4.銀染色法

此法是Switzer.R.C和Merril.CR首先提出的,它較CBB R250靈敏100倍。但染色機(jī)制

尚不清楚,可能與攝影過(guò)程Ag+的還原相似。其靈敏度很高,牛血清為4×10-5μg/mm2,即清蛋白為8×10-5μg/mm2,cyt C為1.7×10-4μg/mm2,因此也常用于凝膠電泳蛋白質(zhì)染色。

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