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ELISA實驗中,顯色和比色的注意事項

更新時間:2015-06-12      瀏覽次數(shù):2263

大家在做ELISA實驗的時候,難免遇到顯色和比色的問題,上海信帆生物為大家詳細講解顯色和比色的問題。

TMB 經(jīng)HRP 作用后,約40 分鐘顯色達,隨即逐漸減弱,至2 小時后即可*消退至無色。TMB 的終止液有多種,疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉(SDS)等酶抑制劑均可使反應終止。這類終止劑尚能使藍色維持較長時間(12-24 小時)不褪,是目視判斷的良好終止劑。此外,各類酸性終止液則會使藍色轉(zhuǎn)變成黃色,此時可用特定的波長(450nm)測讀吸光值。酶標比色儀簡稱酶標儀,通常指于測讀ELISA 結(jié)果吸光度的光度計。酶標儀的主要性能指標有:測讀速度、讀數(shù)的準確性、重復性、度和可測范圍、線性等等。優(yōu)良的酶標儀的讀數(shù)一般可到0.001,準確性為±1%,重復性達0.5%。酶標儀不應安置在陽光或強光照射下,操作時室溫宜在15 -30℃ ,使用前先預熱儀器 15-30 分鐘,測讀結(jié)果更穩(wěn)定。

測讀 A 值時,要選用產(chǎn)物的敏感吸收峰,如OPD用492nm 波長。有的酶標儀可用雙波長式測讀,即每孔先后測讀兩次,*次在zui適波長(W1),第二次在不敏感波長(W2),兩次測定間不 移動ELISA 板的位置,zui終測得的A 值為兩者之差(W1-W2)。雙波長式測讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

肉眼判斷結(jié)果時,顯色淺不易觀察,影響結(jié)果的準確性,必須使用酶標儀檢測,以保結(jié)果一致性。

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