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ELISA實(shí)驗(yàn)中,顯色和比色的注意事項(xiàng)

更新時(shí)間:2015-06-12      瀏覽次數(shù):2420

大家在做ELISA實(shí)驗(yàn)的時(shí)候,難免遇到顯色和比色的問題,上海信帆生物為大家詳細(xì)講解顯色和比色的問題。

TMB 經(jīng)HRP 作用后,約40 分鐘顯色達(dá),隨即逐漸減弱,至2 小時(shí)后即可*消退至無色。TMB 的終止液有多種,疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉(SDS)等酶抑制劑均可使反應(yīng)終止。這類終止劑尚能使藍(lán)色維持較長時(shí)間(12-24 小時(shí))不褪,是目視判斷的良好終止劑。此外,各類酸性終止液則會(huì)使藍(lán)色轉(zhuǎn)變成黃色,此時(shí)可用特定的波長(450nm)測(cè)讀吸光值。酶標(biāo)比色儀簡稱酶標(biāo)儀,通常指于測(cè)讀ELISA 結(jié)果吸光度的光度計(jì)。酶標(biāo)儀的主要性能指標(biāo)有:測(cè)讀速度、讀數(shù)的準(zhǔn)確性、重復(fù)性、度和可測(cè)范圍、線性等等。優(yōu)良的酶標(biāo)儀的讀數(shù)一般可到0.001,準(zhǔn)確性為±1%,重復(fù)性達(dá)0.5%。酶標(biāo)儀不應(yīng)安置在陽光或強(qiáng)光照射下,操作時(shí)室溫宜在15 -30℃ ,使用前先預(yù)熱儀器 15-30 分鐘,測(cè)讀結(jié)果更穩(wěn)定。

測(cè)讀 A 值時(shí),要選用產(chǎn)物的敏感吸收峰,如OPD用492nm 波長。有的酶標(biāo)儀可用雙波長式測(cè)讀,即每孔先后測(cè)讀兩次,*次在zui適波長(W1),第二次在不敏感波長(W2),兩次測(cè)定間不 移動(dòng)ELISA 板的位置,zui終測(cè)得的A 值為兩者之差(W1-W2)。雙波長式測(cè)讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

肉眼判斷結(jié)果時(shí),顯色淺不易觀察,影響結(jié)果的準(zhǔn)確性,必須使用酶標(biāo)儀檢測(cè),以保結(jié)果一致性。

如果你想了解更多ELISA實(shí)驗(yàn)的內(nèi)容,咨詢。

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