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人癌胚抗原(CEA)含量檢測(cè)原理

更新時(shí)間:2024-08-07      瀏覽次數(shù):635

人癌胚抗原(CEA)含量檢測(cè)原理


背景介紹:

癌胚抗原(CEA)描述了一組參與細(xì)胞粘附的高度相關(guān)的糖蛋白。它通常在胎兒發(fā)育過(guò)程中的胃腸組織中產(chǎn)生,但在出生前停止產(chǎn)生,所以CEA在健康成年人血液中的含量通常很低(約2-4納克/毫升)。然而,在某些類(lèi)型的癌癥中血清水平會(huì)升高,這意味著它可以在臨床試驗(yàn)中作為腫瘤標(biāo)志物使用。重度吸煙者的血清水平也會(huì)升高。CEA是糖基磷脂酰肌醇(GPI)細(xì)胞表面錨定的糖蛋白,其專(zhuān)門(mén)的硅藻糖基化糖型可作為功能性結(jié)腸癌L-選擇素和E-選擇素配體,可能對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移擴(kuò)散至關(guān)重要。從免疫學(xué)角度看,它們的特征是CD66分化簇的成員。這些蛋白包括CD66a、CD66b、CD66c、CD66d、CD66e、CD66f。


檢測(cè)原理:

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被人癌胚抗原(CEA)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過(guò)溫育并徹-底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人癌胚抗原(CEA)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度。


試劑盒組成

名稱(chēng)

96孔配置

48孔配置

備注

微孔酶標(biāo)板

12孔×8條

12孔×4條

無(wú)

標(biāo)準(zhǔn)品

0.3mL×6管

0.3mL×6管

無(wú)

樣本稀釋液

6mL

3mL

無(wú)

檢測(cè)抗體-HRP

10mL

5mL

無(wú)

20×洗滌緩沖液

25mL

15mL

按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋

底物A

6mL

3mL

無(wú)

底物B

6mL

3mL

無(wú)

終止液

6mL

3mL

無(wú)

封板膜

2張

2張

無(wú)

說(shuō)明書(shū)

1份

1份

無(wú)

自封袋

1個(gè)

1個(gè)

無(wú)

注:

1.  標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為:40、20、10、5、2.5、1.25 ng/mL

2.  經(jīng)過(guò)大量正常標(biāo)本檢驗(yàn),標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測(cè)范圍內(nèi),實(shí)驗(yàn)過(guò)程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過(guò)最大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時(shí),可用樣本稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。


操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;

3.  待測(cè)樣本孔先加待測(cè)樣本50μL,空白孔不加。樣本不足的情況下,上樣量最少10μL。操作方法:待測(cè)樣本孔先加待測(cè)樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL。

4.  除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿(mǎn)洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。

6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。


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