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超微量 Na +K+–ATP 酶測(cè)試盒的測(cè)定意義

更新時(shí)間:2023-12-06      瀏覽次數(shù):477

超微量 Na +K+–ATP 酶測(cè)試盒的測(cè)定意義

測(cè)組織、培養(yǎng)細(xì)胞)


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二、樣本的前處理:
1、組織的前處理:(組織勻漿上清液的制備參考實(shí)驗(yàn)方法學(xué))
準(zhǔn)確稱取組織重量,按重量(g):體積(mL)=1:9 比例,加入 9 倍體積的生理鹽水,冰水浴條件下機(jī)械勻漿,2500 轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,取上清液(即 10%的勻
漿上清液),再用生理鹽水 10 倍稀釋成 1%,同時(shí)用考馬斯亮藍(lán)試劑測(cè)定組織蛋白(試劑本所有售)。如果預(yù)試結(jié)果太高,再將 1%的組織勻漿稀釋成不同濃度再進(jìn)行預(yù)試再?zèng)Q定取樣濃度。
2、培養(yǎng)細(xì)胞的前處理:將培養(yǎng)細(xì)胞消化,離心,棄上清,留下層細(xì)胞,每管加 0.20.3mL 生理鹽水或勻漿介質(zhì)制備10 7 /cm3 細(xì)胞懸液,即 10 7 /mL,再進(jìn)行破碎。破碎細(xì)胞的方法有三種:①、用勻漿器勻漿。②、用超聲粉碎器粉碎。③、反復(fù)凍溶 3 (第③種方法有時(shí)會(huì)影響酶活力)。制備好的細(xì)胞懸液不需要離心,同時(shí)用考馬斯亮蘭試劑測(cè)定組織蛋白(試劑本所有售)。再將細(xì)胞勻漿液稀釋成不同濃度進(jìn)行預(yù)試,根據(jù)預(yù)試結(jié)果決定取樣濃度。
[1]:在測(cè)試加樣前要搖勻后取樣。
[2]:不可用磷酸鹽緩沖液或含磷的試劑作為樣本勻漿或稀釋樣本。

[3]:預(yù)試結(jié)果將絕對(duì)吸光度值(A 測(cè)定—A 對(duì)照)控制在 0.2 左右為宜。



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