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羊口蹄疫O型液相阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

更新時(shí)間:2020-07-29      瀏覽次數(shù):1705

羊口蹄疫O型液相阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

上海信帆生物供應(yīng)羊口蹄疫O型液相阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒,產(chǎn)品可用于獸醫(yī)診斷,質(zhì)量穩(wěn)定,深受廣大用戶(hù)青睞,讓我們一起來(lái)看看這個(gè)試劑盒的操作步驟吧!

【產(chǎn)品名稱(chēng)】
通用名稱(chēng):口蹄疫O型液相阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒
英文名稱(chēng):Liquid-phase Blocking ELISA Kit for Detecting FMDV Type O Antibodies
【規(guī)格】96T×2塊
【用途】
檢測(cè)羊血清中的口蹄疫O型抗體,適用于動(dòng)物疫苗免疫抗體監(jiān)測(cè)。
【儲(chǔ)藏與有效期】2~8℃保存,有效期12個(gè)月。
 
【主要組份】 
 

序號(hào)組份名稱(chēng)數(shù)量
1FMDV-O抗原包被板96T×2塊
2HRP-O型FMD單抗12mL×1瓶
3樣品稀釋液20mL×1瓶
4FMDV-O陰性對(duì)照1.0mL×1管
5FMDV-O陽(yáng)性對(duì)照1.0mL×1管
6單組份TMB12mL×1瓶
7終止液12mL×1瓶
8濃縮洗滌液(20×)20mL×1瓶
9說(shuō)明書(shū)1份

 

【試驗(yàn)操作】
1、洗滌液配制 
將濃縮洗滌液(20×)用蒸餾水或去離子水稀釋成洗滌液(1×),即1份濃縮洗滌液加入19份蒸餾水,配制的洗滌液(1×)作為洗板用。
 
2、定性檢測(cè)方案(單孔定性,每板檢測(cè)92份血清樣本)
 
【操作步驟】
2.1加樣:設(shè)陰性對(duì)照血清(A1B1)和陽(yáng)性血清(C1D1)各2孔,直接加入50ul/孔對(duì)照血清;其它為被檢樣品孔,預(yù)先在相應(yīng)孔內(nèi)加入45ul的稀釋液,接著加入5ul/孔待檢血清;后,在所有孔內(nèi)均加入50ul的HRP-O型FMD單抗,被檢血清即為1:20稀釋。振蕩,混勻,37℃溫育30分鐘。
2.2TMB底物:用洗滌液洗板3遍,后一次拍干,加入TMB底物,50ul/孔,37℃溫育15分鐘。
2.3反應(yīng)終止: 加入終止液,50ul/孔,終止反應(yīng)。
2.4讀值:酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)讀數(shù)。
 
【計(jì)算方法】
2.5阻斷率計(jì)算
陰性對(duì)照平均值=(OD-A1+OD-B1)/2;
陽(yáng)性對(duì)照平均值=(OD+C1+OD+D1)/2;
樣品阻斷率 PI=[(陰性對(duì)照平均值-樣品OD值)/陰性對(duì)照平均值]×100%
根據(jù)以上公式計(jì)算被檢樣品和陽(yáng)性對(duì)照樣品的阻斷率。
   2.6試驗(yàn)成立
    兩孔陰性對(duì)照OD450nm值至少一孔OD值大于0.5;兩孔陽(yáng)性對(duì)照至少一孔的阻斷率大于60%。
【結(jié)果判定】
被檢樣品PI≥50%判為口蹄疫病毒O型抗體陽(yáng)性;PI<50%判為口蹄疫病毒O型抗體陰性。
 
3、檢測(cè)方案(每板檢測(cè)10或20份血清樣本)
 
在使用前,所有的試劑盒組份應(yīng)恢復(fù)到室溫。試劑應(yīng)輕輕旋轉(zhuǎn)或振蕩混勻。每個(gè)樣品使用一個(gè)單獨(dú)的吸頭。
3.1樣品稀釋: 取出FMD-O抗原包被板,根據(jù)不同的需要,選擇圖1或圖2中的一種布局進(jìn)行操作。圖1為可檢測(cè)10份樣品布局圖;圖2為可檢測(cè)20份樣品布局圖。每次試驗(yàn),每板均需設(shè)置陰陽(yáng)性血清對(duì)照及4孔不加血清單抗對(duì)照。
以圖1為例操作,A1~A10每孔各加75µL的稀釋液,其它所有孔內(nèi)各加入50µL的稀釋液。A1~A10每孔各加25µL的待檢樣品,A11孔加50µL的陽(yáng)性對(duì)照,A12孔加50µL的陰性對(duì)照,用排槍吹打混勻(每孔吹打3~5次),待檢樣品A1~A10分別以50µL/孔的量從A到H連續(xù)2倍稀釋?zhuān)魂?yáng)性對(duì)照A11以50µL/孔的量從A到H連續(xù)2倍稀釋?zhuān)魂幮詫?duì)照A12以50µL/孔的量從A到B連續(xù)2倍稀釋。待檢樣品在第1~10列從1:4稀釋至1:512;陽(yáng)性對(duì)照,從1:2稀釋至1:256,由于試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照已1:4稀釋?zhuān)瑒t變?yōu)閺?:8稀釋至1:1024;陰性對(duì)照,從1:2稀釋至1:4。
3.2 加入HRP-O型FMD單抗:樣品稀釋好后,在所有孔內(nèi)加入50ul的HRP-O型FMD單抗,反應(yīng)體系即為100µL/孔。加樣完畢后,所有稀釋度翻倍,待檢樣品從1:8~1:1024,陽(yáng)性對(duì)照從1:16~1:2048,陰性對(duì)照從1:4~1:8,貼封板膜,振蕩混勻。將加好樣的ELISA反應(yīng)板置于37℃溫育30分鐘。
3.3洗板:用230μL(±20μL)洗滌液(1×)洗滌板孔,共洗滌3次。每次洗滌后應(yīng)棄去孔內(nèi)的液體。在后一次洗滌液棄去后,將孔中殘留的洗滌液拍干。按50μL/孔加入TMB底物,37℃避光溫育10~15min。
3.4讀值: 每孔再加50μL終止液終止反應(yīng),立即在450nm波長(zhǎng)下讀取OD值。
 

圖1  96孔板檢測(cè)10份樣品布局圖 
 123456789101112
AS1 1:8S2S3S4S5S6S7S8S9S101:161:4
B1:16         1:321:8
C1:32         1:64空白
D1:64         1:128空白
E1:128         1:256 
不加血清單抗
對(duì)照
F1:256         1:512
G1:512         1:1024
H1:1024         1:2048

 

圖2  96孔板檢測(cè)20份樣品布局圖 
 123456789101112
AS1 1:16S2S3S4S5S6S7S8S9S101:161:4
B1:32         1:321:8
C1:64         1:64空白
D1:128         1:128空白
ES11 1:16S12S13S14S15S16S17S18S19S201:256 
不加血清單抗
對(duì)照
F1:32         1:512
G1:64         1:1024
H1:128         1:2048

 

 
【結(jié)果分析】
3.5試驗(yàn)成立判斷
不加血清單抗對(duì)照OD值應(yīng)在2.0±1.5范圍內(nèi);
陽(yáng)性對(duì)照抗體效價(jià)不低于1:1024±1滴度;
陰性對(duì)照抗體效價(jià)應(yīng)<1:8。
3.6結(jié)果判定
不加血清單抗對(duì)照4孔,棄去高和低OD值,計(jì)算剩余2孔的平均OD值,再除以2,即得50%對(duì)照值,該值即為臨界值,表示阻斷50%反應(yīng)的對(duì)照OD值。待檢樣品OD值>臨界值,判為陰性孔;待檢樣品OD值≤臨界值,判為陽(yáng)性孔。每份待檢樣品系列梯度稀釋中,陽(yáng)性孔的高稀釋倍數(shù)即為該待檢樣品的抗體效價(jià)。若臨界值處于兩個(gè)稀釋孔OD值之間,抗體效價(jià)取相鄰陽(yáng)性孔和陰性孔稀釋倍數(shù)的反對(duì)數(shù)中間值。如臨界值處于1:64(反對(duì)數(shù)值為1.8)與1:128(反對(duì)數(shù)值為2.1)之間,則判定該份待檢樣品的抗體效價(jià)為1:90(反對(duì)數(shù)值為1.95)。
抗體效價(jià)≥64,為疫苗免疫合格。
抗體效價(jià)計(jì)算對(duì)照表(反對(duì)數(shù)值)

抗體效價(jià)Log10(效價(jià))
對(duì)照計(jì)算
抗體效價(jià)Log10(效價(jià))
對(duì)照計(jì)算
抗體效價(jià)Log10(效價(jià))
對(duì)照計(jì)算
1:40.61:321.51:2562.4
1:60.751:451.651:3602.55
1:80.91:641.81:5122.7
1:111.051:901.951:7202.85
1:161.21:1282.11:10243
1:221.351:1802.251:14403.15

 

 
4、注意事項(xiàng)
4.1 為使您的實(shí)驗(yàn)獲得正確結(jié)果,請(qǐng)您在實(shí)驗(yàn)前仔細(xì)閱讀本說(shuō)明書(shū)。
4.2 所有試劑使用前恢復(fù)至室溫(18~26℃),以免溫度過(guò)低影響抗原抗體反應(yīng)。
4.3實(shí)驗(yàn)前應(yīng)用溫度計(jì)檢查溫箱溫度,溫度過(guò)高或過(guò)低影響OD值高低。
4.4 包被板反應(yīng)時(shí)嚴(yán)禁堆疊放置,應(yīng)該平鋪且板間有空隙,不要離溫箱壁太近。
4.5實(shí)驗(yàn)所用移液器及設(shè)備應(yīng)定期校準(zhǔn)。
4.6采集的樣品要新鮮,并且好不要溶血。血清標(biāo)本在2~8℃放置不要超過(guò)2天,室溫不超過(guò)8小時(shí),如需長(zhǎng)時(shí)間放置應(yīng)儲(chǔ)存于-20℃。 

 

羊口蹄疫O型液相阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

 

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