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信帆生物為您提供:I型鼠尾膠原蛋白的使用方法

更新時(shí)間:2018-06-12      瀏覽次數(shù):2038

信帆生物為您提供:I型鼠尾膠原蛋白的使用方法

購(gòu)買I型鼠尾膠原蛋白找上海信帆生物,專業(yè)供應(yīng)I型鼠尾膠原蛋白。

鼠尾膠原蛋白 I 型(rattailtendon collagen type I)是通過 Birkedal-Hansen 的方法,通過醋酸抽提、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的。本公司鼠尾膠原蛋白可用于包被細(xì)胞培養(yǎng)器皿,培養(yǎng)一些在普通細(xì)胞培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細(xì)胞。也可用于制備三維膠,模擬真實(shí)的生長(zhǎng)環(huán)境,使細(xì)胞在三維環(huán)境中生長(zhǎng)。

1,在使用鼠膠原蛋白 I 型包被的細(xì)胞培養(yǎng)皿中檢查到 PC-12 細(xì)胞的貼壁和生長(zhǎng)。

2,在 1mg/ml 濃度以上,pH 為 7 左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度的三維膠,檢查到 NIH-3T3 細(xì)胞在三維膠內(nèi)正

常生長(zhǎng)、PC-12 細(xì)胞在三維膠表面正常生長(zhǎng)。

使用方法:

1、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被 推薦濃度: 1-5ug/cm2

以包被濃度為 2 ug/cm2為例:用無菌 0.006mol/L(0.36g/L) 乙酸將膠原蛋白稀釋到 0.012mg/ml。

確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面,開蓋在超凈臺(tái)上過夜晾干。 也可以在室溫放置 1小時(shí)后,用PBS洗3-4次后直接使用。包被好的器皿在 4-25℃至少可保存3個(gè)月以上的時(shí)間。

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2、三維膠原的制備

鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/mL以上,pH 7左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/mL。膠原蛋白溶解于0.006mol/L 乙酸中,在成膠過程中需要加入0.06×體積的 0.1mol/L NaOH 來中和。

需要的溶液(均需要無菌、預(yù)冷):10×PBS(可含10 mg/L的酚紅用于pH指示)或10×培養(yǎng)液,0.1mol/L NaOH,0.1mol/L 乙酸(一般不用),雙蒸水

A. 不含細(xì)胞的三維膠原的制備(以配制1mL,1mg/mL三維膠為例):將200μL鼠尾膠原蛋白I型(5mg/mL)加到置于冰浴的離心管中,加入 690μL H2O。然后加到12μL 0.1mol/L NaOH中(如果反過來把12μL 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中,會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),立即混勻。再加入100μL 10×PBS或10×培養(yǎng)液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,初次使用時(shí)需要用pH試紙測(cè)試)。將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是10×PBS,使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。

B.含細(xì)胞的三維膠原的制備(以配制1 mL,1mg/mL三維膠為例):準(zhǔn)備好懸浮于培養(yǎng)液的細(xì)胞,并放置于冰浴中。將200μL鼠尾膠原蛋白I型 (5mg/mL)加到12μL 0.1mol/L NaOH中(如果反過來把12μL 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中,會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),立即混勻。再加入23μL 10×PBS或10×培養(yǎng)液,混勻(混勻后pH為7左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,初次使用時(shí)需要用pH試紙測(cè)試)。加入760μL的細(xì)胞懸浮液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫下放置20分鐘待膠凝固后,加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

注意事項(xiàng):

鼠尾膠原蛋白I型在室溫下pH中性時(shí)可迅速成膠,在操作過程中要盡量保持低溫。

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